免疫共沉淀的实验流程是怎样的呢？

2023年11月06日 11:15:54 人气: 814 来源: 北京百奥创新科技有限公司

What is Co-IP？

Co-IP全称Co-Immunoprecipitation，中文学名免疫共沉淀，是一种以抗体和抗原识别专一性为基础，用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。

通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来（同时不能破坏蛋白之间的相互作用），然后用预先结合了琼脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗体捕获样本中的A蛋白，那么与A蛋白结合的B蛋白也能一起沉淀下来。再将蛋白从珠子上裂解下来，对B蛋白进行检测，能检测到，说明B蛋白在之前的沉淀过程中随着A蛋白一起被拉下来了，进而证明二者之间存在相互关系。那么免疫共沉淀的实验流程是怎样的呢？一起来学习一下吧！

实验流程

样本制备：细胞样本，收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂，冰上裂解，超声破碎，离心取上清。组织样本，剪碎组织，按组织量加入裂解液和蛋白酶抑制剂，用匀浆液匀浆，直至充分裂解，留心取上清。、
细胞裂解物预清除（选做）：向制备好的裂解物中分别加入一定量的protein A和protein G，4°C旋转孵育后，离心取上清。 (目的是去除样本中能和琼脂糖珠非特异性吸附的杂质，使得后续结果更好)
加入A蛋白的IP抗体：按照抗体说明书的使用比例，添加一定量的A抗体 (能适用于IP实验)，4°C轻柔混合过夜。
免疫复合物沉检：加入一定量的Protein A和Protein G，4C温和地混1- 3小时或过夜，离心保留沉淀，并清洗沉淀3次。(注意:清洗去上清的时候需要避免吸走填料)
洗税与检测蛋自：根据样本的性质和下游检测手段，选择合适的洗脱缓冲液，使用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物与珠子分离。接着进行下游检测实验。
以上就是有关于免疫共沉淀的实验流程是怎样的问题解答，如果你想了解更多请咨询百奥创新客服哦！

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