PIPES缓冲液说明书

标准溶液的配制：

1.直接配制法    对于纯净的物质(称做基准物质)可准确进行称量，用蒸馏水溶解后，转移到一定容积的容量瓶中稀释至标线，溶液的准确浓度可以直接计算出来。溶质的纯度、性质等对浓度有较大影响，为此，对用来直接配制标准溶液用的基准物质必须具备以下条件：

(1)物质的纯度要高，含量不得低于99.9％，杂质的含量应当少到可以忽略的程度。

(2)物质的分子组成应与其化学式*符合，包括结水合物中的结品水含量也必须与其化学式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性质稳定，贮蔵时应不发生变化，不易吸收空气中的水分、二氧化碳等气体而改变其成分，不易风化潮解和被空气氧化，烘干时不易分解等。此外最好使用分子量较大的基准物质以减小称量误差。

2.间接配制法    凡不符合基准物质条件的物质，可先配制成近似所需浓度的溶液，再用基准物质溶液或能与其发生定量反应的标准溶液进行滴定，求其准确浓度，这种通过滴定来确定准确浓度的操作叫做“标定”。间接法配制近似浓度溶液时不需用分析天平称量和容量瓶配制，可用台秤、量筒等器皿。将称好的物质转移到干净的试剂瓶中，先加少量蒸馏水将其溶解，继续用量筒加蒸馏水至需要量即可。由于大多数试剂不符合基准物的条件，故间接法配制标准溶液是经常的。如固体NaOH因易吸收空气中的水分而潮解和吸收CO2使表面变质；浓盐酸因易挥发而无法准确称量；不易得到分析纯级的试剂等，这些物质的标准溶液须用间接法来配制，经标定后再做标准溶液使用。

公司产品具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

产品名称：PIPES缓冲液说明书

货号：BJ-01R3470

规格：100ml

分类：细胞检测

储存条件：4℃,6个月

用途：流式细胞术检测细胞周期

注意事项：主要由PIPES、氯化钠、氯化镁、Triton X-100等组成。

注意事项：

1、尽注意无菌操作，避免污染。

2、避免反复冻融。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

标准溶液的标定：

1.用基准物质标定法

(1)多次称量法    用减重法精密称取几份(如2～3份)基准物质，分别倒入编号的干净锥形瓶(或烧杯)内，各加少量蒸馏水溶解，再加指示剂后分别用待标定溶液滴定至等当点，各自记录所消耗待标定溶液的体积，结合基准物质的重量分别算出溶液的准确浓度，最后取平均值做为标准溶液的浓度。

(2)移液管法    精密称取一份基准物质，在干净的小烧杯内加少量蒸馏水溶解，顺玻棒全部转移到已校正好的容量瓶中，多次冲洗烧杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定体积的溶液，混匀。每次滴定用配套的移液管吸取并转移至锥形瓶中，加指示剂后用待标定溶液滴定至等当点，每次做好记录，根据所消耗待标定溶液的体积，结合基准物质的重量，分别算出溶液的准确浓度取平均值做为标准溶液的浓度。

2.比较法标定    如果待标定溶液能与某标准溶液进行反应，可吸量一定体积的某标准溶液，用待标定溶液滴定，或吸量一定体积的待标定溶液，用某标准溶液滴定。根据两溶液所消耗的毫升数及某标准溶液的浓度，按N1V1＝N2V2式可以计算出待标定溶液的准确浓度。这种用标准落液来测定待标定溶液准确浓度的过程称为“比较法”标定。如果某标准溶液的浓度由于某些原因不够准确时，就会直接影响待标定溶液浓度的准确性，显然比较法不如用基准物质直接标定的方法精确，但比较法简便易行。

标定完毕，盖紧标准溶液试剂瓶塞，瓶签上注明标准溶液名称、准确浓度和日期等。

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）     转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2） 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5） 之后更换正常培养基培养即可。

Radix pulsatillae白头翁探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周FAM46D/CT112  瘤/睾抗原112抗体 规格: 0.2mlGPS1/CSN1  G蛋白通路抑制蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus(AbSV)鲍肌肉症病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周SDCG1  清学定义结肠抗原1抗体 规格: 0.2mlPhospho-FGFR1 (Tyr766)  磷酸化碱性成纤维细胞生因子受体1抗体 规格: 0.1ml

E.coli大肠杆通用探针法荧光定量PCR试剂盒(含致病性和非致病性) 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-Filamin A/FLNA (Tyr1046)  磷酸化细丝蛋白A抗体 规格: 0.1ml

Flos campsis凌霄花LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周AGPA/Alpha 1 Acid Glycoprotein  α1酸性糖蛋白1/类粘蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Prevotella melaninogenica黑色普雷沃LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周MTMR8  肌管素相关蛋白8抗体 规格: 0.2ml

Mycoplasma fermentans发酵支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PMS1  瘤错配修复基因PMS1抗体 规格: 0.2ml

Chrysomyxa arctostaphyli云杉帚锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CDK1/Cdc2  周期素依赖性激1抗体 规格: 0.1ml

Vesicular Stomatitis Virus Indiana Serotype(VSV-IND)水泡性口炎病毒印第安纳型RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周X protein/HB-X (N-Terminus)  抗乙肝毒X蛋白抗体（N端） 规格: 0.2ml

Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)鲤春病毒血症病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ANKS3  锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体 规格: 0.2ml

Gongylonema ingluvicola嗉囊食通虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周KLHL9  kelch样蛋白9抗体 规格: 0.2ml

PIPES缓冲液说明书人半连接修饰亚基(GCLM)联免疫吸附测定试剂盒 Human GCLM (Glutamate Cysteine Ligase, Modifier Subunit) ELISA Kit

人脱氢(GDH/GLDH)联免疫吸附测定试剂盒   Human GDH/GLDH (Glutamate dehydrogenase) ELISA Kit

人脱羧(GAD)联免疫吸附测定试剂盒  Human GAD (Glutamic Acid Decarboxylase) ELISA Kit

人脱羧抗体(GAD-Ab/Anti-GAD)联免疫吸附测定试剂盒 Human GAD-Ab (Anti-Glutamic Acid Decarboxylase antibody) ELISA Kit

人脱羧2(GAD2)联免疫吸附测定试剂盒 Human GAD2 (Glutamate Decarboxylase 2) ELISA Kit

人肽S转移(GSTs)联免疫吸附测定试剂盒  Human GSTs (Glutathione S-Transferases) ELISA Kit

人肽S-转移α1(GSTα1)联免疫吸附测定试剂盒 Human GSTα1 (Glutathione S Transferase Alpha 1) ELISA Kit

人肽S-转移θ1(GSTθ1/GSTt1)联免疫吸附测定试剂盒 Human GSTθ1/GSTt1 (Glutathione S Transferase Theta 1) ELISA Kit

人肽S转移θ2(GSTθ2/GSTt2)联免疫吸附测定试剂盒 Human GSTθ2/GSTt2 (Glutathione S Transferase Theta 2) ELISA Kit

人肽S转移ω1(GSTω1)联免疫吸附测定试剂盒 Human GSTω1 (Glutathione S Transferase Omega 1) ELISA Kit

人组蛋白脱乙酰基(HDAC2)联免疫吸附测定试剂盒 Human HDAC2 (Histone Deacetylase 2) ELISA Kit

人C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(C1QTNF1)联免疫吸附测定试剂盒 Human C1QTNF1 (C1q and Tumor Necrosis Factor Related Protein 1) ELISA Kit

人肽还原(GR)联免疫吸附测定试剂盒 Human GR (Glutathione Reductase) ELISA Kit

人肽S转移pi基因(GSTpi)联免疫吸附测定试剂盒  Human GSTpi (Glutathione S Transferases Pi) ELISA Kit